Производитель:
ООО НПП «ЛЕТО», Россия, г. Новосибирск, ул. Большая 256а
тел. +7 923 123 3344, e-mail: septisol@mail.ru
Научное исследование Минимизировать

ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ «БИОТОН»

(ООО «Биотон»)

 

УТВЕРЖДАЮ:
Директор ООО "Биотон"
 Н. К. Евтин

 

ОТЧЕТ О НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКОЙ РАБОТЕ

по теме: «Изучение антибактериального, антипаразитарного, противовирусного и противогрибкового действия натуропатического средства «Септисол»
(заключительный)

 

Руководитель темы:
Заместитель директора ООО «Биотон», д. м. н., профессор
А. Н. Сергеев
Новосибирск 2007

 

РЕФЕРАТ

Отчет 13 с., 3 табл., 8 источник литературы

СРЕДСТВО «СЕПТИСОЛ», ВИРУСЫ, БАКТЕРИИ, ПРОСТЕЙШИЕ, ГРИБЫ. Объектами исследования является: средство «Септисол», вирусы, бактерии, простейшие, грибы.

Целью настоящих исследований явилась оценка противовирусного, противогрибкового, антипаразитарного и антибактериального действия натуропатического многофункционального оздоровительного средства «Септисол» для наружного применения, включая слизистые.

В работе были использованы экспериментальные методы исследования (вирусологические, бактериологические, фунгологические).

Показано, что средство «Септисол» обладает выраженным противовирусным действием в отношении вирусов гриппа, аденовируса человека и вирусов простого герпеса и противохламидийным действием. Установлено, что натуропатическое многофункциональное оздоровительное средство «Септисол» не обладает инактивирующим действием в отношении вирусов и хламидий, находящихся внутри клеток, несмотря на это, наблюдается выраженный противовирусный и противохламидийный эффект на стадии распространения патогенов к интактным клеткам, что оказывает тормозящее действие на развитие инфекции. Показана явно выраженная антибактериальная, противопаразитарная в отношении трихомонад активность натуропатического многофункционального оздоровительного средства «Септисол». Кроме того, средство обладает противогрибковым действием в отношении Сап. albicans, Can. Tropicalis и Asp. niger.

СОДЕРЖАНИЕ

    Стр.
  Обозначения и сокращения  4
  Введение 5
  Основная часть 6
1.  Цель исследования 6
2.  Материалы и методы 6
  Оценка противовирусной, противогрибковой и антибактериальной активности натуропатического многофункционального оздоровительного средства «Септисол». 7
3.  Заключение 12
  Список использованных источников 13

ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ

БОЕ
— бляшкообразующие единицы
ГНЦ ВБ — Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии
ООО — общество с ограниченной ответственностью
ФГУН — Федеральное государственное учреждение науки
Asp. — Аспиригилум
Сап. — кандида
Сог. — коринебактерия
Е. — эсшерихия
М — среднее значение
m — ошибка среднего значения
Mic. — микоплазма
N. — нейссерия
Р. — псевдомонада
S. — стафилококк
Sal. — сальмонелла
Sh. — шигелла
Str. — стрептококк
Тг. — трипонема
Ur. — уреаплазма
 

ВВЕДЕНИЕ

Современные средства наружного применения, использующиеся в настоящее время для лечения и профилактики заболеваний инфекционной природы, в основном имеют направленное действие в отношении узкого спектра возбудителей. В случаях, когда необходимо предупредить или провести лечение абсолютно отличающихся друг от друга заболеваний человеку необходимо использовать множество разных средств, которые не всегда достаточно эффективны. В свою очередь создание средства способного эффективно предупреждать и лечить множество инфекционных заболеваний разного происхождения существенно бы отразилось на общем здоровье населения Сибирского региона и Российской Федерации в целом.

Выше сказанное подтолкнуло исследователей ООО НПП «ЛЕТО» к созданию нового уникального натуропатического многофункционального оздоровительного средства «Септисол» для наружного применения способного оказывать терапевтическое и профилактическое действие в отношении огромного количества инфекционных заболеваний разной этиологии.

Состав средства «Септисол»: ионные комплексы меди, прополис, мед, камедь, каменное масло, мумие, живица, экстракты лекарственных трав (ромашка, шалфей, лопух, подорожник и др.) на природной родниковой воде с повышенным содержанием ионов серебра.

Богатый набор активных веществ и экстрактов растений наделил средство «Септисол» свойствами способными оказывать антибактериальное, противовирусное, противопаразитарное и противогрибковое действие.

ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ

1. Цель исследования

Целью исследования является оценка противовирусного, противогрибкового, противопаразитарного и антибактериального действия натуропатического многофункционального оздоровительного средства «Септисол» для наружного применения, включая слизистые.

2. Материалы и методы

Работы проводились сотрудниками ООО «Биотон» на арендованных помещениях и оборудовании ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор».

Вирусы. В работе использовали вирус гриппа штамм A/Aichi/2/68 (H3N2), вирус гриппа птиц штамм A/Chicken/Suzdalka/Nov-11/2005 (H5N1), аденовируса человека 5-го серотипа штамм Adel75, вирус простого герпеса 1-о типа штамм HF и вирус простого герпеса 2-о типа штамм MS.

Бактерии, простейшие, грибы

В качестве представителей бактерий были взяты в работу стафилококки: S. aureus, S. saprophyticus, S. hominis, S. haemolyticus, S. epidermidis; стрептококки: Str. pyogenes, Str. pneumoniae, Str. agalactiae, Str. viridans; грамотрицательные кокки — нейссерии: N. meningitidis, N. gonorrhoeae; псевдомонады: P. aeruginosa (синегнойная палочка) Р. putida; кишечные палочки — E. coli энтеротоксигенная, энтероинвазивная, энтеропатогенная, энтерогеморагическая; дифтерийная палочка — Cor. diphtheriae, сальмонеллы: Sal. enteritidis, Sal. typhinurium; шигелла дизентирии: Sh. flexneri, Sh. sonnei, Sh. dysenteriae; хламидии — Chi. trachomatis; трихомонады: Tr. elongata, Tr. hominis, Tr. vaginalis; микоплазма и уреаплазма: Mic. hominis, Ur. urealiticum; грибы рода кандида — Сап. albicans, Can. tropicalis и грибы Asp. niger.

Культуры клеток

Для проведения вирусологических и бактериологических работ использовали перевиваемые культуры клеток, а именно: для исследований с использованием вирусов гриппа применяли культуру клеток MDCK; для аденовируса человека 5-о серотипа и для хламидии применяли культуру клеток HeLa; в качестве клеточной системы для исследования ВПГ-1, ВПГ-2 использовали культуру клеток Vero [Культура животных клеток, 1989].

Оценка противовирусного действия средства «Септисол»

Профилактический эффект средства «Септисол» для лечения вирусных инфекций оценивали с помощью ранее описанной реакции нейтрализации вирусов с использованием культур клеток [Field's Virology, 2001; Лурия и Дарнел, 1970; Вирусология, 1988]. Серийные последовательные разведения с двукратным шагом средства «Септисол» смешивали с рабочим разведением вируса, содержащим от 50 до 80 БОЕ. Полученную суспензию вносили на монослой культур клеток. Адсорбцию вируса проводили в течение одного часа при 37 °С. После чего не адсорбированный вирус удаляли из планшеты, после чего в нее добавляли питательную среду. Инфицированные клетки культивировали в течение 2-3 суток при температуре 37 °С. Учет результатов осуществляли, исходя из определения максимального разведения средства «Септисол», которое вызывает уменьшение числа бляшек на монослое культур клеток по сравнению с контрольным количеством бляшек на 50 или более процентов.

Лечебное действие средства «Септисол» оценивали с помощью добавления его серийных последовательных разведений с двукратным шагом в питательную среду с инфицированным монослоем культур клеток. Доза заражения монослоя составляла 50-80 БОЕ на лунку. Культивировали в течение 2-3 суток при температуре 37 °С. Оценку лечебной активности средства «Септисол» проводили, определяя максимальное разведение средства «Септисол» способное вызывать уменьшение числа бляшек на монослое культур клеток по сравнению с контрольным количеством бляшек на 50 или более процентов.

Оценка противохламидийного действия средства «Септисол» Для изучения противохламидийного действия «Септисола» использовали метод нейтрализации хламидий в культуре клеток HeLa. Бактериоскопию хламидий в клетках выполняли с помощью метода фазово-контрастной микроскопии [Коротяев и Бабичев, 2002; Никифоров и Шкарин, 2000].

Оценка антибактериального, противогрибкового и противопаразитарного действия средства «Септисол»

Определение литической активности средства «Септисол» в отношении бактерий, простейших и грибов оценивали общепринятым методом серийных разведений для определения наименьшей литической концентрации средства [Зыков, 1977; Никифоров и Шкарин, 2000].

Статистическая обработка результатов. Статистическую обработку полученных результатов проводили общепринятыми методами [Ашмарин и Воробьев, 1962].

3. Оценка противовирусной, противогрибковой и антибактериальной активности натуропатического многофункционального оздоровительного средства «Септисол»

На первом этапе исследования оценивали профилактическое действие средства «Септисол» на примере его специфического деструктивного воздействия на вирусы гриппа, аденовирус человека 5-о серотипа, ВПГ-1 и ВПГ-2 на стадии предшествующей инфицированию клеток. По результатам исследования средство «Септисол» инактивирует вирус гриппа штамм A/Aichi/2/68 (H3N2) и вирус гриппа птиц штамм A/Chicken/Suzdalka/Nov-11/2005 (H5N1) в виде уменьшения количества бляшек на 50 и более процентов в монослое культур клеток MDCK по сравнению с контролем в разведении средства 1:128. Уменьшение более чем на 50% числа бляшек образованных аденовирусом человека 5-о серотипа штамм Adel 75 в монослое культуры клеток HeLa по сравнению с контролем наблюдалось при разведении «Септисола» 1:256. В то же время, противовирусная активность в отношении штаммов HF и MS вирусов простого герпеса наблюдалась только при разведении средства 1:64 за счет уменьшения количества БОЕ в монослое клеток Vero в сравнении с контролем.

Таблица 1. Определение профилактического противовирусного действия средства «Септисол»

Штамм вируса
Количество БОЕ в разведениях средства «Септисол»
К
Т
1:2
1:4
1:8
1:16
1:32
1:64
1:128
1:256
1:512
1:1024
Aichi
0
0
0
0
0
5
26
75
78
80
75
1:128
Suzdalka
0
0
0
0
0
5
20
57
65
70
67
1:128
Adel 75
0
0
0
0
0
2
15
25
59
63
65
1:256
HF
0
0
0
0
2
21
58
62
63
62
60
1:64
MS
0
0
0
0
3
18
54
61
60
65
62
1:64

Примечание: Aichi — штамм вируса гриппа A/Aichi/2/68 (H3N2); Suzdalka — штамм вируса гриппа птиц A/Chicken/Suzdalka/Nov-1/2005 (H5N1); Adel 75 — штамм аденовируса человека 5-о серотипа Adel 75; HF — штамм вируса простого герпеса 1-о типа HF; MS — штамм вирусапростого герпеса 2-о типа MS; К — количество БОЕ в контроле (без добавления средства «Септисол»); Т — титр средства «Септисол», оказывающий противовирусное действие.

Полученные данные свидетельствуют о выраженном профилактическом эффекте, направленном против вирусов гриппа, аденовируса человека и вирусов простого герпеса натуропатического многофункционального оздоровительного средства «Септисол» для наружного применения, включая слизистые, в исследованиях in vitro.

На втором этапе оценивали лечебную активность средства «Септисол» при добавлении его к инфицированным вирусами гриппа, аденовирусом человека 5-о серотипа, вирусами простого герпеса 1-о и 2-о типов монослоям культур клеток. В результате установили, что достоверного изменения в инфицированных вирусами монослоях клеток по количеству бляшек в сравнении с контролем при культивировании в течение 3 суток не наблюдается. Результаты не приводятся. Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что средство «Септисол» не оказывает лечебного действия на ранее инфицированные клетки. Однако, при культивировании инфицированных монослоев культур клеток с добавленным средством «Септисол» в культуральную жидкость, наблюдали значимое снижение вирусного урожая в сравнении с контролем (без добавления средства). Для вируса гриппа штамм A/Aichi/2/68 (H3N2) при культивировании на монослое клеток MDCK с использованием культуральной среды без добавления средства «Септисол» урожай составлял 6,3±0,2 lg (БОЕ)/мл в тоже время при добавлении средства концентрация вируса снизилась до 3,0±0,1 lg (БОЕ)/мл. Вирус гриппа птиц штамм A/Chicken/Suzdalka/Nov-11/2005 (H5N1) нарабатывался до концентрации 6,8±0,2 lg (БОЕ)/мл без добавления средства на той же культуре клеток, а при добавлении средства концентрация вируса составила 3,0±0,3 lg (БОЕ)/мл. Культивирование аденовируса человека 5-о серотипа штамм Adel 75 на культуре клеток HeLa с добавлением средства «Септисол» принесло более низкую урожайность вируса 2,8±0,2 lg (БОЕ)/мл по сравнению с урожайностью вируса без применения средства 7,3±0,1 lg (БОЕ)/мл. В случае с ВПГ-1 урожай вируса на кульуре клеток Vero при добавлении средства составил 4,0±0,1 lg (БОЕ)/мл и 3,8 ±0,4lg (БОЕ)/мл для вируса ВПГ-2 в то же время при культивировании вирусов в отсутствии средства «Септисол» для штамма HF вируса простого герпеса 1-о типа получили 6,0±0,1 lg (БОЕ)/мл и 6,2±0,2 lg (БОЕ)/мл для штамма MS вируса простого герпеса 2-о типа.

Таблица 2  Изменение урожайности вирусов при культивировании в монослое культур клеток под воздействием средства «Септисол» 

Средство «Септисол»
Концентрация штаммов вирусов в культуральной жидкости в lg (БОЕ)/мл (М±m)
Aichi
Suzdalka
Adel 75
HF
MS
добавлено
3,0±0,1
3,0±0,3
2,8±0,2
4,0±0,1
3,8±0,4
нет
6,3±0,2
6,8±0,2
7.3±0,1
6,0±0,1
6,2±0,2

Примечание: Aichi — штамм вируса гриппа A/Aichi/2/68 (H3N2); Suzdalka — штамм вируса гриппа птиц A/Chicken/Suzdalka/Nov-11/2005 (H5N1); Adel 75 — штамм аденовируса человека 5-о серотипа Adel 75; HF — штамм вируса простого герпеса 1-о типа HF; MS — штамм вируса простого герпеса 2-о типа MS.

Эти данные дают основание предполагать, что хотя средство «Септисол» не способно оказы­вать ингибирующего воздействия на вирус, находящийся внутри клеток и тем самым лечить уже инфицированные клетки, оно все-таки обладает вирулицидным действием в отношении вирусов, которые выходят из клеток или находится вне клеток и благодаря этому предотвращает их распространение на окружающие, не зараженные клетки. В связи с этим средство «Септисол» обладает лечебным эффектом, который осуществляется за счет подавления распространения вирусов к окружающим незараженным клеткам.

На следующем этапе исследовали противохламидийное действие «Септисола». Было установлено, что подавление инфекционности хламидий на стадии предшествующей проникновению в клетку наблюдается даже при разведении средства «Септисол» 1:512. В тоже время при воздействии средства «Септисол» на зараженный монослой культуры клеток HeLa в течение первых 2 суток значимого уменьшения в числе инфицированных клеток при подсчете в фазово-контрастном микроскопе по сравнению с контролем не наблюдали. Однако, начиная с 3-х и по 6-е сутки культивирования, разница между контролем и опытом становилась очевидной.

Количество инфицированных клеток в контроле к 6-м суткам стало больше в 3 раза по сравнению с опытом. Полученные данные свидетельствуют об отсутствии литического или любого другого действия средства «Септисол» на хламидии внутри клеток. Однако при этом наблюдается выраженный противохламидийный эффект на стадии распространения инфекции к окружающим интактным клеткам сходный с таковым для вирусов. Таким образом, лечебный эффект натуропатического многофункционального оздоровительного средства «Септисол» для наружного применения, включая слизистые, предположительно связан с блокированием распространения хламидиии к окружающим здоровым клеткам.

В следующей серии экспериментов оценивали антибактериальное, противогрибковое и противопаразитарное действие средства «Септисол». Данные представлены в таблице 3. По результатам проведенных исследований было установлено, что средство «Септисол» обладает бактерицидным действием в наибольшем разведении: для стафилококков — 1:256; для стрептококков от 1:128 до 1:256; для грамотрицательных кокков — нейссерии 1:128; для псевдомонад 1:64; для кишечных палочек и дифтерийной палочки 1:256, для сальмонелл и шигелл 1:256; для микоплазмы и уреаплазмы 1:128. В то же время для трихомонад средство «Септисол» обладает противопаразитарным действием в разведении 1:64. Противогрибковым действием в отношении Can. albicans, Can. Tropicalis и Asp. niger средство «Септисол» обладает в максимальном разведении 1:32.

Таблица 3. Определение чувствительности бактерий к средству «Септисол» 

Бактерии
Наличие — (+) или отсутствие — (-) колоний микроорганизмов на пита­тельной среде при добавлении разведений средства «Септисол»
Т
1:2
1:4
1:8
1:16
1:32
1:64
1:128
1:256
1:512
1:1024
S. aureus
-
-
-
-
-
-
-
-
+
+
1:256
S. saprophyticus
-
-
-
-
-
-
-
-
+
+
1:256
S. hominis
-
-
-
-
-
-
-
-
 
+
1:256
S. haemolyticus
-
-
-
-
-
-
-
-
+
+
1:256
S. epidermidis
-
-
-
-
-
-
-
-
+
+
1:256
Str. pyogenes
-
-
-
-
-
-
-
+
+
+
1:128
Str. pneumoniae
-
-
-
-
-
-
-
-
+
+
1:256
Str. agalactiae
-
-
-
-
-
-
-
+
+
+
1:128
Str. viridans
-
-
-
-
-
-
-
+
+
+
1:128
N. meningitidis
-
-
-
-
-
-
-
+
+
+
1:128
N. gonorrhoeae
-
-
-
-
-
-
-
+
+
+
1:128
P. aeruginosa
-
-
-
-
-
-
+
+
+
+
1:64
P. putida
-
-
-
-
-
-
+
+
+
+
1:64
E. coli энтеротоксигенная
-
-
-
-
-
-
-
-
+
+
1:256
E. coli энтероинвазивная
-
-
-
-
-
-
-
-
+
+
1:256
E. coli энтеропатогенная
-
-
-
-
-
-
-
-
+
+
1:256
E. coli энтерогеморагическая
-
-
-
-
-
-
-
-
+
+
1:256
Cor. diphtheriae
-
-
-
-
-
-
-
-
+
+
1:256
Sal. enteritidis
-
-
-
-
-
-
-
-
+
+
1:256
Sal. typhinurium
-
-
-
-
-
-
-
-
+
+
1:256
Sh. flexneri
-
-
-
-
-
-
-
-
+
+
1:256
Sh. sonnei
-
-
-
-
-
-
-
-
+
+
1:256
Sh. dysenteriae
-
-
-
-
-
-
-
-
+
+
1:256
Mic. hominis
-
-
-
-
-
-
-
+
+
+
1:128
Ur. urealiticum
-
-
-
-
-
-
-
 
+
+
1:128
Простейшие
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Tr. elongata
-
-
-
-
-
-
+
+
+
+
1:64
Tr. hominis
-
-
-
-
-
-
+
+
+
+
1:64
Tr. vaginalis
-
-
-
-
-
-
+
+
+
+
1:64
Грибы
 
 
 
 
 
 
 
 
 
+
 
Can. albicans
-
-
-
-
-
+
+
+
+
+
1:32
Can. tropicalis.
-
-
-
-
-
+
+
+
+
+
1:32
Asp. niger
-
-
-
-
-
+
+
+
+
+
1:32

Примечание: Т — титр средства «Септисол», оказывающий антибактериальное, противопаразитарное, противогрибковое действие.

Полученные данные указывают на явно выраженную антибактериальную, противопаразитарную в отношении трихомонад активность натуропатического многофункционального оздоровительного средства «Септисол» для наружного применения, включая слизистые. Кроме того, средство обладает выраженным противогрибковым действием в отношении Can. albicans, Can. Tropicalis, Asp. niger.

Заключение

Существующие на сегодняшний день средства наружного применения, которые используются населением для лечения и профилактики заболеваний инфекционной природы главным образом обладают направленным действием в отношении определенных инфекционных агентов. Зачастую возникает необходимость предупредить или провести лечение абсолютно отличающихся друг от друга заболеваний в результате человеку необходимо использовать множество различных по своему составу и принципам действия средств, которые к тому же не всегда достаточно эффективны.

Исследователями ООО НПП «ЛЕТО» было разработано уникальное натуропатическое многофункциональное оздоровительное средство «Септисол» для наружного применения, включая слизистые, способное оказывать терапевтическое и профилактическое действие в отношении огромного количества инфекционных заболеваний разной этиологии.

Целью исследования являлась оценка противовирусного, противопаразитарного, противогрибкового и антибактериального действия натуропатического многофункционального оздоровительного средства «Септисол» для наружного применения, включая слизистые.

В работе были использованы экспериментальные методы исследования (вирусологические, бактериологические, фунгологические).

Показано что средство «Септисол» обладает выраженным противовирусным действием в отношении вирусов гриппа, аденовируса человека и вирусов простого герпеса и противохламидийным действием, что дает основание для использования этого средства в целях профилактики и лечения данных заболеваний. Однако установлено, что натуропатическое многофункциональное оздоровительное средство «Септисол» не обладает деструктивным действием в отношении вирусов и хламидий, находящихся внутри клеток. Несмотря на это наблюдается выраженный противовирусный и противохламидийный эффект на стадии распространения инфекции к окружающим интактным клеткам, что оказывает тормозящее действие на развитие инфекции. Показана явно выраженная антибактериальная, противопаразитарная в отношении трихомонад активность натуропатического многофункционального оздоровительного средства «Септисол». Кроме того, средство обладает противогрибковым действием в отношении Can. albicans, Can. Tropicalis и Asp. niger.

Список использованных литературных источников

  1. Ашмарин И. П., Воробьев А. А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. — Л.: Гос. изд. мед. лит., 1962.
  2. Вирусология. Методы: Пер. с англ./Под ред. Б. Мейхи. — М.:Мир, 1988. — 344 с.
  3. Коротяев А. И., Бабичев С. А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: Учебник для мед. вузов. — 3-е изд. — СПб.: СпецЛит, 2002. — 591 с.
  4. Культура животных клеток. Методы: Пер. с англ./Под ред. Р. Фрешни. — М.: Мир, 1989. — 333 с.
  5. Лурия С., Дарнел Дж. Общая вирусология/Под ред. Ю. З. Гендона. — М.: Мир, 1970. — 423 с.
  6. Никифоров В. А., Шкарин В. В. Медицинская микробиология (общие и эколого-эпидемиологические аспекты): Учеб. пособие. — Н. Новгород: Изд-во Нижегородской государственной медицинской академии, 2000. — 248 с.
  7. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, иммунологии и вирусологии. Под ред. М. П. Зыкова. М., «Медицина», 1977. — 288 с.
  8. Field's Virology /editors-in-chief, D. M. Knipe, P. M. Howley. — 4th ed. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins, 2001. — P. 5125

 

 
The actual cartier replica uk is made to match the actual replica watches since they're more predominant, however may match the actual Daytona, rolex replica sale, fake hublot, the actual Explorer II (16750), as well as Explorer We 39mm. Mid-September ought to provide a good lemon coloured edition, as well as LV eco-friendly as well as army azure within mid-October.